هموفیلوس آنفلوانزا (H.influenzae) روی شکلات آگار، کلنی‌های این باکتری روی شکلات آگار صاف، گرد با حاشیه کامل، نسبتاً کدر و خاکستری رنگ هستند. هموفیلوس آنفلوانزا برای رشد خود به فاکتورهای X و V نیاز دارد. هر دو فاکتور در شکلات آگار وجود دارند.

هموفیلوس آنفلوانزا روی شکلات آگار (تصویر از نزدیک)، کلنی‌های موکوئیدی و کپسول دار هموفیلوس آنفلوانزا تمایل به تجمع و تلفیق دارند در حالی‌ که کلنی‌های بدون کپسول به شکل منفرد هستند. کلنی‌ها بوی کپک می‌دهند که توصیف شده بویی شبیه به کفش کتانی کثیف دارند.

A. این باکتری برای رشد به فاکتور X که ترکیبی از Heme است و فاکتور V که نیکوتین آمید آدنین دی‌نوکلئوتید (NAD به عنوان کوآنزیم I) یا نیکوتین آمید آدنین دی‌نوکلئوتید فسفات (NADP به عنوان کوآنزیم II) است، نیاز دارد. این فاکتورها برای شناسایی گونه‌های هموفیلوس اهمیت دارند. در این روش نوارها یا دیسک‌های فیلتری کاغذی به فاکتور X، فاکتور V و یا هر دو فاکتور آغشته می‌شوند. سوسپانسیونی از میکروارگانیسم روی یک محیط کشت بدون فاکتور توزیع می‌شود و سپس نوارها روی آن قرار داده می‌شوند. پلیت به مدت ۲۴ ساعت در حضور CO2 ۵% انکوبه می‌شود و رشد میکرو ارگانیسم در اطراف دیسک مشاهده می‌شود. این باکتری فقط در حضور فاکتور X و V رشد می‌کند و کدورت کمی در اطراف نوار XV ایجاد می‌شود.
B. همــوفیلوس آنفلوانـزا در اطـراف استافیلوکوکوس اورئوس دایره وار رشد می‌کند. خون موجود در آگار (Hemin) فاکتور X را تامین می‌کند و استافیلوکوکوس، NAD (فاکتورV) را فراهم می‌نماید. بنابراین هموفیلوس آنفلوانزا در نزدیک خط رشد استافیلوکوکوس اورئوس امکان رشد پیدا می‌کند.

شناسایی هموفیلوس آنفلونزا به وسیله آزمایش تولید پورفیرین، این آزمایش هموفیلوس پاراآنفلونزا را از هموفیلوس آنفلونزا متمایز می‌کند. نتیجه تست در باکتری اول مثبت و در دومی منفی است. هموفیلوس پاراآنفلونزا دارای آنزیمی به نام پورفی بیلی نوژن سنتتاز است که دلتا آمینو لوونیک اسید را به پورفیرین و پور فوبیلینوژن تبدیل می‌کند. معرف کواکس (پارا دی‌متیل آمینو بنزآلدئید) پورفی بیلی نوژن را شناسایی می‌کند. با این معرف پور فیرین‌ها تحت تاثیر نور UV حاصل از لامپ Wood، فلئورسنس متمایل به قرمز تولید می‌کنند. کشت مایع هموفیلوس پاراآنفلوانزا زیر لامپ Wood فلئورسنس قرمز تولید می‌کند (سمت چپ) و هموفیلوس آنفلوانزا فلئورسنس تولید نمی‌کند (سمت راست).

کلنی‌های هموفیلوس پاراآنفلوانزا (H.parainfluenzae) روی شکـلات آگار، این کلنی‌ها تقریباً ۳ میکرومتر قطر دارند. مات، گرد و درخشان هستند. این گونه‌ها جزء فلور نرمال دستگاه فوقانی تنفس می‌باشند. افتراق این ارگانیسم از هموفیلوس آنفلوانزا به عنوان یک پاتوژن دستگاه تحتانی تنفس مهم است.

شناسایی هموفیلوس پاراآنفلوانزا و هموفیلوس افروفیلوس (H.aphrophilus) با روش قندهای مینی‌تـک (Minitek sugars)، این یک روش بیوشیمیایی می‌باشد که شامل دیسک‌های کاغذی است و آغشته به موادی است که برای افتراق انواع باکتری‌های گرم مثبت و منفی و مخمر‌ها کاربرد دارد. یک پلیت پلاستیکی با بیست حفره برای آزمایش؛ در این نمونه کربوهیدرات‌های آزمایش شده شامل: گلوکز (D)، مالتوز (M)، سوکروز (SU)، لاکتوز (L)، مانیتول (M) و گزیلول (X) می‌باشند. هموفیلوس افروفیلوس لاکتوز را اکسید می‌کند.