هموفیلوس آنفلوانزا (H.influenzae) روی شکلات آگار، کلنی‌های این باکتری روی شکلات آگار صاف، گرد با حاشیه کامل، نسبتاً کدر و خاکستری رنگ هستند. هموفیلوس آنفلوانزا برای رشد خود به فاکتورهای X و V نیاز دارد. هر دو فاکتور در شکلات آگار وجود دارند.

هموفیلوس آنفلوانزا روی شکلات آگار (تصویر از نزدیک)، کلنی‌های موکوئیدی و کپسول دار هموفیلوس آنفلوانزا تمایل به تجمع و تلفیق دارند در حالی‌ که کلنی‌های بدون کپسول به شکل منفرد هستند. کلنی‌ها بوی کپک می‌دهند که توصیف شده بویی شبیه به کفش کتانی کثیف دارند.

A. این باکتری برای رشد به فاکتور X که ترکیبی از Heme است و فاکتور V که نیکوتین آمید آدنین دی‌نوکلئوتید (NAD به عنوان کوآنزیم I) یا نیکوتین آمید آدنین دی‌نوکلئوتید فسفات (NADP به عنوان کوآنزیم II) است، نیاز دارد. این فاکتورها برای شناسایی گونه‌های هموفیلوس اهمیت دارند. در این روش نوارها یا دیسک‌های فیلتری کاغذی به فاکتور X، فاکتور V و یا هر دو فاکتور آغشته می‌شوند. سوسپانسیونی از میکروارگانیسم روی یک محیط کشت بدون فاکتور توزیع می‌شود و سپس نوارها روی آن قرار داده می‌شوند. پلیت به مدت ۲۴ ساعت در حضور CO2 ۵% انکوبه می‌شود و رشد میکرو ارگانیسم در اطراف دیسک مشاهده می‌شود. این باکتری فقط در حضور فاکتور X و V رشد می‌کند و کدورت کمی در اطراف نوار XV ایجاد می‌شود.
B. همــوفیلوس آنفلوانـزا در اطـراف استافیلوکوکوس اورئوس دایره وار رشد می‌کند. خون موجود در آگار (Hemin) فاکتور X را تامین می‌کند و استافیلوکوکوس، NAD (فاکتورV) را فراهم می‌نماید. بنابراین هموفیلوس آنفلوانزا در نزدیک خط رشد استافیلوکوکوس اورئوس امکان رشد پیدا می‌کند.